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分子雜交儀工作原理、分類以及注意事項

  • 時間:2023-05-15
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分子雜交儀(又名:分子雜交箱、分子雜交爐)廣泛地使用于克隆基因的篩選、酶切圖譜的制作、基因組中特定基因序列的定性、定量檢測和疾病的診斷等方面。因而它不僅在分子生物學領(lǐng)域中具有廣泛地應(yīng)用,而且在臨床診斷上的應(yīng)用也日趨增多。


分子雜交儀-上海那艾


分子雜交儀工作原理



分子雜交儀其基本原理就是應(yīng)用核酸分子的變性和復性的性質(zhì),使來源不同的DNA(或RNA)片段,按堿基互補關(guān)系形成雜交雙鏈分子(heteroduplex)。雜交雙鏈可以在DNA與DNA鏈之間,也可在RNA與DNA鏈之間形成。



核酸分子雜交是基因診斷的最基本的方法之一。它的基本原理是:互補的DNA單鏈能夠在一定條件下結(jié)合成雙鏈,即能夠進行雜交。這種結(jié)合是特異的,即嚴格按照堿基互補的原則進行,它不僅能在DNA和DNA之間進行,也能在DNA和RNA之間進行。因此,當用一段已知基因的核酸序列作出探針,與變性后的單鏈基因組DNA接觸時,如果兩者的堿基完全配對,它們即互補地結(jié)合成雙鏈,從而表明被測基因組DNA中含有已知的基因序列。由此可見,進行基因檢測有兩個必要條件,一是必需的特異的DNA探針;二是必需的基因組DNA。當兩者都變性呈單鏈狀態(tài)時,就能進行分子雜交。



分子雜交儀分類



根據(jù)實驗的需求,可以將分子雜交儀分為5大類。



1、是用于大容量的分子雜交儀;



2、用于Southern或者Northern技術(shù)點雜交的雜交儀;



3、用于小容量的核酸雜交儀;



4、微孔板原位雜交儀;



5、載玻片原位雜交和平板雜交儀;



6、Western雜交儀。



原位分子雜交,斑點分子雜交,所用的分子雜交箱是振蕩式的搖床分子雜交箱;Southern、Northern、Western雜交,所用的雜交儀是旋子式雜交儀,儀器采用獨特的滾動式反應(yīng)架裝置,配套特制密封雜交管在水平軸上旋轉(zhuǎn),使雜交管內(nèi)壁上的雜交反應(yīng)膜各處能均勻地雜交液反復地接觸,充分反應(yīng)。



功能能齊全的分子雜交儀儀器部件有:箱體、雜交瓶轉(zhuǎn)架或離心管轉(zhuǎn)架、雜交管、搖床、隔膜、電腦控制系統(tǒng)等部件組成??捎糜赟outhern、Northern、Western等分子雜交,還可以用于原位雜交。不同型號的箱體容納的管子數(shù),微孔版數(shù),載波片數(shù)和平板數(shù)也不同。分子雜交儀的結(jié)構(gòu)和功能。



功能能齊全的分子雜交儀都有一下功能:微電腦智能控制,液晶顯示三種功能(溫度顯示、瓶架旋轉(zhuǎn)速度、托盤擺動速度)。具有存儲記憶功能,可以直觀顯示系統(tǒng)的運行狀況。溫度控制采用數(shù)字PID技術(shù),輸出采用PWM方式,控溫精度高,穩(wěn)定性好,并設(shè)有超溫保護裝置,該儀器可以同時直觀箱內(nèi)控溫溫度,滾動式瓶架旋轉(zhuǎn)速度,酶標板或試劑托盤的擺動速度。同時任意選擇您所需要的控溫溫度,瓶架旋轉(zhuǎn)速度,搖床擺動速度。



分子雜交儀注意事項



1.分子雜交儀需要安裝在有良好接觸的電源插座上。



2.恒溫室處于高溫狀態(tài)裝取雜交管時,注意不要燙傷!



3.雜交管在裝入反應(yīng)液前一定要清洗干凈,裝入反應(yīng)液及反應(yīng)膜后一定要擰緊瓶蓋,以免漏夜。



4. 在進行同位素標記的雜交實驗時,必須檢查雜交管的密封情況,以免造成污染。一旦發(fā)生污染,請及時告知有關(guān)部門的使用人員和檢修人員,盡可能的減少不必要的傷害。



由于分子雜交儀設(shè)計結(jié)構(gòu)緊湊,密封性要求高,所以在儀器運行中出現(xiàn)故障需要檢修時,應(yīng)切斷電源由專業(yè)技術(shù)人員進行。